流式細胞術檢測稀少細胞
稀有細胞,其單獨存在或在相對低數量的細胞混合物中存在,通常指示健康狀態。細胞存在于它們通常不存在的地方,例如循環血液中的內皮細胞,表明存在嚴重的病理。
流式細胞儀在發現稀有細胞和理解它們如何與更豐富的細胞不同方面發揮了重要作用。MilliporeSigma(Billerica,MA)的流式細胞儀成像產品經理Sherree Friend博士說:“在過去,顯微鏡是要走的路,但這種技術需要一個訓練有素的操作員長時間掃描視野。考慮到觀察和人類耐力的限制,檢測足以用于稀有細胞的統計驗證的細胞數量變得困難。
顯微鏡仍然用于表征通過流動方法分離的稀有細胞。基于細胞的形態學評估,使用事件和分子特異性熒光標簽,通常涉及細胞儀下游的附加步驟和儀器。MilliporeSigma的Amnis®成像流式細胞儀結合了這些關鍵的分析功能。
在一個應用中,來自布法羅大學(NY)的研究人員通過定量外周血T淋巴細胞中NF-kB的易位程度來研究器官移植患者的免疫抑制水平。研究者得出結論,通過成像流式細胞術獲得的數據可以幫助指導移植患者中免疫抑制藥物的適當劑量水平。盡管細胞和蛋白質在技術上都不是“罕見的”,但是這說明了可以進行細胞分析的細節。
在另一個實驗中,來自加拿大衛生部的研究人員開發了一種檢測罕見的雙核細胞以定量微核的測定法,目前通過顯微鏡進行的過程。研究者得出結論,成像流式細胞術可以提供一種更快速和更準確的方法來估計來自意外輻射暴露的未知輻射劑量。
結合顯微鏡和細胞計數術提出了關于罕見細胞事件的一個有趣的觀點。朋友解釋說,“當觀察它們時,研究人員經常擔心人為因素 - 例如顆粒粘在細胞上。將成像與流式細胞術結合提供了額外的能力來驗證罕見事件不是假的,特別是當您沒有數千個細胞或事件時。它允許您同時識別細胞形態和發生。
速度和數字很重要
從臨床角度來看,罕見細胞計數事件的分析有時可以檢測“**小殘留病變”(MRD),當某些疾病似乎被根除但是在非常基本的水平時,不發生。在為白血病或淋巴瘤治療的患者中討論MRD是常見的,其中血常常是正常的,并且患者感覺良好,但它們**終復發并因其疾病死亡。
常規診斷不能檢測指示**終復發的危險MRD水平。
評估實體瘤中的MRD是困難的,因為細胞附著在異質組織內。血癌更加“診斷友好”,因為危險因子可以作為單一的低豐度細胞檢測到。
MRD相關細胞發生在100,000以下的水平,被認為不可能在患者的正常壽命內引起復發。“Beckman Coulter(邁阿密,佛羅里達州)科學事務總監Jeannine Holden博士說,”但是你不能知道樣品中的濃度是否相關。診斷師必須計數足夠的細胞以確認觀察結果是統計學相關的,這可能涉及數百萬個細胞的計數。
計數許多離散實體,即使在流式細胞術速度,是昂貴和耗時的。
在樣品制備期間損失了大量的細胞,并且靶細胞群體的富集并不總是實用的。“你正在研究混合10到20種細胞類型,彼此沒有很大的不同,”霍爾頓告訴實驗室經理。挑出靶細胞需要觀察盡可能多的參數或顏色。顏色是指來自不同標簽的熒光發射。骨髓瘤血液樣品含有惡性和正常B細胞??,成熟和不成熟。
疾病相關的細胞可以在治療過程中改變。在診斷中占優勢的細胞通常不同于治療期間或長期緩解期后臨床醫生感興趣的細胞。此外,生物藥物可以對腫瘤細胞群體施加選擇壓力。“如果沒有表達CD20表面抗原的細胞亞群逃避抽取,他們可能會在以后出現,”霍爾頓說。“此外,細胞可能經歷表型漂移。
涂色我的世界
研究人員使用細胞分選或細胞分析儀來表征和分離純的細胞亞群,其通常是具有0.01%和更低的頻率的稀有細胞。除了挑戰之外,起始樣品(例如,原代細胞和循環腫瘤細胞)的可用性通常有限。在血液中循環的腫瘤細胞是液體活檢的基礎,其將基于細胞的診斷超越簡單的形態學表征到蛋白質和基因水平。**認為,液體活檢可能有**會取代許多固體組織活檢。循環腫瘤細胞是相當罕見的,我們對其意義的理解是有限的,但沒有流式細胞術,液體活檢將是不可能的。
Bio-Rad(Hercules,CA)**產品經理Nicole Ovadia表示:“高參數實驗是稀有細胞深度分析的關鍵。這里術語參數和顏色 - 可用的熒光頻率 - 是可互換的。超快速檢測允許細胞儀拾取幾種顏色,代表不同的事件,同時單個細胞拉鏈。
多年來,流式細胞術被困在十種或更少顏色的范圍內。Bio-Rad**近推出了ZE5™細胞分析儀,可以檢測28種顏色和高達100,000次事件或細胞每秒,而不會丟失數據。“這意味著檢測更多的參數,并且比常規流動方法更快速,”Ovadia告訴實驗室經理。通過流式細胞術的**細胞分析正在推進通過儀器和檢測試劑的創新,主要由在細胞表面上表達的蛋白質的熒光標記抗體組成。“一旦平臺存在,試劑和工具就會隨之改進,”MilliporeSigma的朋友說。同時檢測RNA和蛋白質共定位,流式細胞術的相對新的能力,提供對轉錄和翻譯的見解。常規基于細胞的測定法(例如FISH)的適應性增強更窄集中的檢測方法。有了這種類型的“開發”,流式細胞術檢測稀有細胞和相關事件的效用繼續改善,即使儀器已經實現傳統的狀態。
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